Amily | |
Emily | |
Lily |
武汉168飞艇计划生物科技有限公司
-
在线咨询
-
官方邮箱
-
微信下单
-
回到顶部
代谢组学
科研服务
抗体/蛋白
地 址:武汉市东湖新技术开发区高新大道666号,武汉
国家生物产业基地B、C、D区研发楼C1栋
产品销售:15926423062
技术服务:18971263062
E - mail :info@hylpnm.com
邮 编:430075
化合物单体
168飞艇计划生物(Chemstan)所有产品和服务仅用于科学研究,不为任何个人或者非科研性质的用途提供产品和服务。
Copyright @ 武汉168飞艇计划生物科技有限公司.All rights reserved
网站建设:中企动力武汉鄂ICP备27143755号-1
浏览量:
产品名称:
T4 DNA Ligase
NO.
13
货号
CSCE1106
中文名称
T4 DNA Ligase
英文名称
T4 DNA Ligase
CAS号
/
产品货号:
CSCE1106
货期:
现货
价格与订购:
160.00
数量
-
+
库存
100
产品信息
如何订购
产品概述icon
T4 DNA Ligase可催化dsDNA平末端或粘性末端相邻核酸的5'磷酸末端和3'羟基末端形成磷酸二酯键,还可催化RNA和双链中的ssDNA或RNA链连接,但不能催化全单链核苷酸连接。适用于标记RNA 3'-末端,环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
产品组分icon
组分 | CSCE1106(40,000 U) |
T4 DNA Ligase (400 U/μl) | 100 μl |
保存条件icon
-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。
适用范围icon
1. DNA片段和载体DNA的连接。
2. DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
单位定义icon
在20μl的连接反应体系中,6μg的λDNA-HindⅢ的分解物在16℃下反应30 min时,有50%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
反应过程icon
1.在微量离心管中制配制连接反应体系:
灭菌蒸馏水 To 10 μl
10 × Ligase Buffer 1 μl
插入片段a 0.3 pmol
载体DNAb 0.03 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl) 1 μl
a. 插入片段与载体的摩尔比应在3:1 - 10:1之间。
b. 平末端载体与DNA片段进行连接时,应首先将载体进行去磷酸化处理,以防止其自身环化。
2. 16℃过夜反应
3. 连接产物转化
①在冰上解冻克隆用的化学感受态细胞(如:DH5α Competent cell)。
②取10 μl连接产物加入到100 μl感受态细胞中,轻弹管壁混匀(请勿振荡混匀),冰上静置30 min。
▲ 连接产物转化体积最多不应超过所用感受态细胞体积的1/10。
③ 42℃水浴热激45 sec后,立即置于冰上冷却2 - 3 min。
④加入900 μl SOC或LB培养基(不添加抗生素),37℃摇菌1 h(200 - 250 rpm)。
⑤将相应抗性的LB平板固体培养基在37℃培养箱中预热。
⑥ 5,000 rpm(2,400 × g)离心5 min,弃掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬,用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。⑦ 37℃培养箱中倒置培养12 - 16 h。
Noteicon
For research use only .
上一篇
IdeS Protease
E. coli DNA Ligase
下一篇